형광 현미경 : 방법의 원리

상기 광 무기 및 유기 액체의 흡수 및 재 방출 인광 또는 형광의 결과이다. 현상의 차이점은 광속의 흡수 및 배출 간격의 지속 기간이다. 이러한 프로세스의 형광 인광 동안, 거의 동시에 발생한 경우 - 일부 지연.

기록 정보

1852 년 영국 과학자 인 스톡스, 첫번째 형광을 설명했다. 그와 실험의 결과로서 새로운 용어를 도입 형석, 외광하에 적색 광을 방출한다. 스톡스는 재미있는 현상을 지적했다. 형광 방사선의 파장이 반드시 여기 광의 유량보다 큰 것을 알 수있다.

19 세기의 가설을 확인하기 위해이 많은 실험되고있다. 이들 샘플의 다양한 자외선의 영향 하에서 형광을 보여 주었다. 재료 중, 다른 것들,하고 결정, 수지, 미네랄, 엽록소, 생약, 무기 화합물, 비타민, 오일 중. 생물학적 시험에 대한 염료의 직접 사용은 1930 년에만 시작

형광 현미경 : 설명

20 세기 연구의 전반에 사용되는 재료 중 일부는 높은 특이성을 보였다. стал важнейшим инструментом и в биомедицинских, и в биологических исследованиях. 방법을 대조함으로써 달성 될 수없는 성능 덕분에, 형광 현미경의 방법은 생물 의학 및 생물학 연구에 필수적인 도구가되었습니다. 마찬가지로 중요한 결과를 얻을, 및 재료했다.

? 어떤 장점은 형광 현미경의 방법을합니까? 새로운 재료를 사용 가능하게 높은 특정 셀 초 현미경적인 구성 요소의 선택을했다. 형광 현미경은 단일 분자를 감지 할 수 있습니다. 염료의 다양한 한 번에 여러 항목을 식별 할 수 있습니다. 결과적으로, 샘플의 특정 성질에 따라, 장비의 회절 한계의 공간 해상도 제한에도 불구하고,이 분자 수준 아래의 식별은 충분히 가능하다. 조사 전시 자기 형광 후 다양한 샘플. 이러한 현상은 널리 암석학, 식물학, 반도체 산업에서 사용된다.

특징

불특정 형광도 종종 복잡하거나 너무 약하거나 매우 강한 동물의 조직 또는 병원체를 공부한다. 그러나, 연구의 값은 특정 파장에서 여기 된 재료 성분으로 도입하고 필요한 광 흐름 발광 강도를 취득한다. 형광 색소는 (가시 광선 또는 보이지 않는) 구조물에 부착 할 수있는 염료 독립적으로 작용한다. 따라서 이들은 대상에 대한 높은 선택성 및 양자 수율을 갖는다.

стала широко применяться с появлением естественных и синтетических красителей. 형광 현미경 널리 천연 및 합성 염료의 출현부터 사용되어왔다. 그들은 방출 및 여기의 특정 강도 프로파일을 소유하고 특정 생물학적 표적을 대상으로.

개별 분자의 식별

종종, 이상적인 조건에서 별도의 요소 빛을 등록 할 수 있습니다. 이를 위해, 다른 것들 중에서, 상기 광 검출기와 배경의 충분히 낮은 잡음을 제공 할 필요가있다. 때문에 최대 30 만. 광자를 방출 할 수 photobleaching에에 실패 형광 분자. 프로세스의 20 % 포집 효율에서 약 60,000의 양을 등록 할 수 있습니다.

, основанная на лавинных фотодиодах или электронном умножении, позволяла исследователям наблюдать поведение отдельных молекул на протяжении секунд, а в ряде случаев и минут. 애벌 런치 포토 다이오드 또는 전자 곱셈에 따라 형광 현미경, 연구진은 두 번째를 통해 개별 분자의 행동을 관찰 할 수 있으며, 일부의 경우도 분.

복잡성

광학 소음 배경의 억제에 찬성의 핵심 문제를 해결합니다. 때문에 필터와 렌즈 어떤자가 형광을 전시의 설계에 사용되는 재료의 대부분이 초기 단계에서 과학자들의 노력은 낮은 형광을 가진 구성 요소의 생산을 지향하고 있다는 사실. 그러나 이후의 실험은 새로운 결론을 이끌어왔다. , основанная на полном внутреннем отражении, позволяет достичь низкого фона и высокоинтенсивного возбуждающего светового потока. 특히, 전체 내부 반사에 기초하여 형광 현미경은, 그것이 낮은 배경 및 고강도 여기 광을 달성 할 수 있음을 발견 하였다.

기구

, основанной на полном внутреннем отражении, заключаются в использовании быстрозатухающей или нераспространяющейся волны. 총 내부 반사에 따라 형광 현미경의 원리는, 소산 파 또는 사라져의 사용이다. 이것은 다른 매체와의 경계에서 발생 굴절률. 이 경우, 광 빔이 프리즘을 통과한다. 이는 고 굴절율 파라미터를 갖는다.

낮은 파라미터 수용액 또는 유리에 인접하는 프리즘. 더 중요 비스듬히 향하는 광선 경우, 빔은 완전히 계면에서 반사된다. 이 현상은, 차례로, nonpropagating 파도가 발생합니다. 즉, 생성 된 전자기장의 거리 미만의 200 나노 미터 저 굴절율 파라미터 매체로 침투한다.

소멸 파 빛의 강도는 형광 물질을 자극하기에 충분하다. 그러나, 그것의 매우 작은 깊이, 부피가 매우 작을 것이다. 결과는 낮은 수준의 배경입니다.

수정

형광 현미경이 전반사에 기반 에피 조명으로 구현 될 수있다. 이는 높은 개구 수 렌즈를 필요로 (적어도 1.4 있지만 1.45-1.6 도달하는 것이 바람직하다), 부분적으로 전계 조명 장치. 후자는 작은 스폿 크기로 이루어진다. 보다 균일 스트림의 부분에 의해 차단 된 얇은 링을 사용. 전반사가 그 후에 임계각 들어, 렌즈에 액침 매체와의 현미경 커버 글래스의 굴절률의 높은 수준을 필요로한다.